真核基因在原核细胞中表达需要解决哪些问题
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发布时间：2022-04-25 12:34
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热心网友
时间：2024-03-18 18:48
第一,克隆到原核表达系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列.因为原核表达系统没有剪切修饰内含子的相关酶系统.
第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码子偏好是否存在原核表达系统的稀有密码子.那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈.如果有,点突变之.
第三,真核基因可能在表达过程中需要有分子伴侣帮助折叠成正确的构象才会有活性.如果单独的蛋白没有活性,应该考虑是否需要同时克隆分子伴侣基因.
第四,注意控制表达条件,尽量不要形成包涵体.有时候表达量过高反而会形成大量包涵体.包涵体破碎提纯是一个麻烦事,而且容易造成蛋白活性下降或者失活.
笼统这些,操作时候还要具体蛋白具体分析,优化表达条件.比如大肠某些菌株表达一些小肽的时候加一定浓度MgCl2表达量有大幅提高,但使用其它菌株表达此肽或者该菌株表达其他蛋白就无此现象.多查查文献.
热心网友
时间：2024-03-18 18:49
第一，克隆到原核表达系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列。因为原核表达系统没有剪切修饰内含子的相关酶系统。
第二，要用原核的启动子。检查一下真核基因密码子偏好是否存在原核表达系统的稀有密码子。那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈。如果有，点突变之。
第三，真核基因可能在表达过程中需要有分子伴侣帮助折叠成正确的构象才会有活性。如果单独的蛋白没有活性，应该考虑是否需要同时克隆分子伴侣基因。
第四，注意控制表达条件，尽量不要形成包涵体。有时候表达量过高反而会形成大量包涵体。包涵体破碎提纯是一个麻烦事，而且容易造成蛋白活性下降或者失活。
笼统这些，操作时候还要具体蛋白具体分析，优化表达条件。比如大肠某些菌株表达一些小肽的时候加一定浓度MgCl2表达量有大幅提高，但使用其它菌株表达此肽或者该菌株表达其他蛋白就无此现象。多查查文献。
