在提取总RNA和反转录的过程中,如何避免RNase的污染

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1.
使用正确的细胞或组织储存条件
  在样品用液氮瞬间冻结之后,应该储存在-80°c,千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻,也会导致rna的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉,然后置于裂解液中进行匀浆。
  rnafixer使样品储存更为便利。储存在rnafixer中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期,在4°c可稳定保存长达1个月,或永久保存在-20°c。
  2.
消除环境rnase的污染
  为了得到完整的、高品质rna,在整个rna制备过程中,当rna离开强蛋白变性剂(如离液裂解液或酚)的保护时,避免引入新的rnase污染就非常关键。由于rnase几乎是无所不在,所以必须确保与纯化的rna接触的每一样东西都是无rnase污染的。所有的表面,包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备,都必须用表面去污净化溶液如rnase喷雾清除剂
来处理过,去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的rnase污染,可以用rnasafe。必须保证一直使用无rnase的*头、试管和溶液,手套也应经常更换。

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